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人絨毛膜癌細(xì)胞(JEG-3)培養(yǎng)說明書
點擊次數(shù):1719 更新時間:2021-03-23

   人絨毛膜癌細(xì)胞(JEG-3)培養(yǎng)說明書

 

細(xì)胞介紹

這是一株超三倍體人類細(xì)胞株。其典型染色體數(shù)為71,發(fā)生率為34%,多倍體率為2.6%

 

細(xì)胞特性

1) 來源:絨毛膜癌

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T75或者1mL凍存管包裝

 

細(xì)胞接受后的處理:

1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25置于37培養(yǎng)約2-3h

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4) 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

5) 接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                       

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號41500034,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉 0.11g/L)90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3) 凍存液90%血清10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進行傳代培養(yǎng)

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細(xì)胞1-2

2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化

3. 輕輕打后吸出,移入15ml離心管中,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

3) 細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,先要消化處理并進行細(xì)胞計數(shù)消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3驟進行,后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮DMSO終濃度為10%加入DMSO迅速混勻,按每1ml數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。

 

注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系

2. 所有動物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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