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葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1401 更新時(shí)間:2020-03-16

葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組

織等的WEI一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

測(cè)定原理:

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過(guò)氧化氫;過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水

試劑的組成和配制:

試劑一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 10ml×1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 10ml×1 瓶,4℃保存;

葡萄糖提取:

1、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

3其他類液體,離心后可直接取上清檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,蒸餾水調(diào)零。

2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。

3、加樣表(在EP管或96孔板中加入下列試劑):

試劑(μL)

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

樣本

 

 

20

試劑一

 

20

 

蒸餾水

20

 

 

混合試劑

180

180

180

混勻,置 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25'C(其它物種)保溫 15min 后,于 505nm 波長(zhǎng)處讀取吸光

度。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1、A2 和 A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

葡萄糖含量計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。

2、按樣本鮮重計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/104cell)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5µmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;

Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

注意:低檢測(cè)限為 50nmol/g  鮮重或 0.5nmol/mg prot

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)